For English version click here
Příprava a in vitro testovaní HLö7 - univerzální reaktivátor inhibované acetylcholinesterasy
Financováno z:
Interní grantové soutěže FNHK
Řešitelé:
Dávid Maliňák, Jan Korábečný, Miroslav Psotka, Martina Hrabinová, Jana Janočková
Anotace projektu:
Cílem projektu je zejména vypracování a provedení jednodušší syntetické cesty potřebné pro přípravu látky HLö7, a dále také in vitro testování připravené látky. Jak je známo v současnosti se při syntéze HLö7 využívá sloučenina označovaná jako bis(methylsulfonoxymethyl)ether, jejíž syntéza je obtížná. Je k tomu zapotřebí speciální přístrojové vybavení (např. destilace za velmi nízkého tlaku atd.) [1]. Dále látku HLö7 nelze známými vícekrokovými metodami připravit v množství potřebném pro in vivo testování [2], a známé postupy často nejsou reprodukovatelné. Na základě těchto poznatků je hlavním cílem projektu optimalizovat podmínky a tím zjednodušit a zefektivnit přípravu tohoto nejúčinnějšího reaktivátoru AChE. Cílem projektu bude rovněž u připravené látky in vitro stanovení inhibice AChE, ověření reaktivační účinnosti in vitro na vybraných pesticidech (dichlorvos a paraoxon) a stanovení cytotoxicity na vybraných buněčných liniích.
Doba řešení:
1. 1. 2017 - 31. 12. 2017
N-Propargyl-naftochinónové hybridy: Vývoj nových potencionálnych liečiv v boji proti Alzheimerovej chorobe
Financováno z:
Interní grantové soutěže FNHK
Řešitelé:
Jan Korábečný, Eva Mezeiová, Katarína Špilovská, Petr Jošt, Martina Hrabinová, Jana Janočková
Anotace projektu:
Cieľom predkladaného projektu je syntéza nových zlúčenín schopných inhibovať agregáciu beta-amyloidových proteinových residuí. Tieto látky budú navyše schopné aj redukovať oxidatívny stres prostredníctvom inhibície MAO-B a moduláciou MAO-A aktivity môže dôjsť k rozšíreniu palety pôsobenia daných potencionálnych liečiv o antidepresívny účinok. Štruktúrnym základom týchto MTDL bude 1,4-naftochinón v kombinácii s N-propargylovou jednotkou. Pripravené deriváty budú následne podrobené biologickému screeningu a najúspešnejšie deriváty budú potom posunuté do ďalšieho predklinického testovania alebo budú použité ako základ návrhu ďalších analógov s vyššou účinnosťou a selektivitou.
Doba řešení:
1. 1. 2017 - 31. 12. 2017
Analýza nevazebných interakcí malých molekul a cathepsinu B pomocí HDX hmotnostní spektrometrie
Financováno z:
Interní grantové soutěže FNHK
Řešitelé:
Rafael Doležal, Jana Žďárova Karasová, Karel Musil, Martin Novák, Markéta Benková
Anotace projektu:
Cílem projektu je zavést na pracoviště CBV novou a moderní analytickou metodiku, která má podstatný vztah k výzkumu léčiv na molekulární úrovni. HDX-MS metoda je v celosvětovém měřítku uznávanou alternativou k X-ray a NMR, i když její aplikace, optimalizace a správná interpretace získaných výsledků není pochopitelně snadná. Společně s rozvojem přesné technologie pro hmotnostní spektrometrii (MSE, iontová mobilita, bioinformatika) však představuje HDX-MS perspektivní metodu, která umožňuje analyzovat molekulární proteinovou strukturu, dynamiku, konformační flexibilitu a protein-protein či ligand-protein interakce pro subnanomolární množství vzorku. V současné době je na pracovišti CBV velmi dobře rozvinuta proteomická shot-gun analýza a stanovení metabolitů první fáze in vitro metabolizace pomocí LC-MS/MS, což představuje důležitý základ pro úspěšné zvládnutí HDX-MS techniky. Předkládaný projekt si tedy klade za cíl participovat na komplexním výzkumu a vývoji nových léčiv na CBV FNHK, a to zejména proti pro Alzheimerově nemoci a rakovině. Jako biologický cíl byl pro tento projekt vybrán cathepsin B. V rámci předkládaného projektu budou pomocí HDX-MS metody analyzovány komplexy 5 vybraných nízkomolekulárních modulátorů s cathepsinem B.
Doba řešení:
1. 1. 2017 - 31. 12. 2017
In vitro predikce prostupu potenciálních léčiv pomocí MDCK buněčné linie
Financováno z:
Interní grantové soutěže FNHK
Řešitelé:
Ondřej Soukup, Rafael Doležal, Jana Janočková, Markéta Benková, Tereza Kobrlová
Anotace projektu:
Primárním cílem je zavést novou metodiku na pracoviště CBV, která bude primárně využívat “živý“ model hematoencefalické bariéry reprezentovaný MDCK buněčnou linií. Metodika bude validována pomocí standardně užívaných léčiv v terapii AD (např. donepezil) a látek neprocházejících hematoencefalickou bariéru (např. atenolol). Aktivní transport a efluxní mechanismy této linie budou studovány pomocí standartních léčiv využívají aktivní transport popř. jsou substráty efluxních transportérů jako jsou glykoprotein P (ABCB1) a tzv. multidrug resistence - associated protein 1 (ABCC1) a jejich inhibitorů (LY335979, MK-571).
Doba řešení:
1. 1. 2017 - 31. 12. 2017
Nová léčiva v terapii Alzheimerovy choroby – hybridy kombinující M1 muskarinové agonisty s NSAID
Financováno z:
Interní grantové soutěže FNHK
Řešitelé:
Eugenie Nepovimová, Ngoc Lam Pham, Thuy Duong Nguyen, Ondřej Soukup, Jan Korábečný, Jana Janočková
Anotace projektu:
Cílem projektu je příprava nových MTDLs, kombinujících ve své molekule agonistu M1 muskarinových receptorů s protizánětlivě působící sloučeninou. Za strukturní základ farmakoforu interagujícího s mAChR byla zvolena redukovaná forma bicyklické sloučeniny AF150(S). Protizánětlivá složka molekuly je zastoupena klinicky užívanými nesteroidními antiflogistiky (NSAID). Tyto MTDLs budou následně biologickým screeningem validovány pro svůj potenciál v terapii AD (pozitivní modulace M1 mAChR a protizánětlivý účinek). Nejúspěšnější deriváty se stanou podkladem pro další preklinické testování.
Doba řešení:
1. 1. 2017 - 31. 12. 2017
Exprese a purifikace lidské rekombinantní beta-sekretasy a validace in vitro testu ke stanovení její aktivity
Financováno z:
Interní grantové soutěže FNHK
Řešitelé:
Martina Hrabinová, Monika Schmidt, Daniel Jun, Kamil Musílek, Vendula Šepsová
Anotace projektu:
Hlavním úkolem tohoto projektu je zavedení exprese a purifikace rekombinantního proteinu beta-sekretasy (BACE1) jakožto potenciálního cíle pro terapeutické ovlivnění Alzheimerovy nemoci. Exprese a purifikace proteinu bude probíhat v lidských ledvinných embryonálních buňkách (HEK293), které jsou schopny zajistit všechny nezbytné posttranslační modifikace tohoto enzymu. Tento systém zajistí dostatečnou aktivitu a stabilitu enzymu potřebnou pro následující validaci kolorimetrické metody. Nová metodika stanovení aktivity BACE1 rozšíří portfolio testovaných enzymů zapojených v patofyziologii AD. Na základě získaných výsledků bude podán externí projekt GAČR nebo AZV MZ ČR.
Doba řešení:
1. 1. 2017 - 31. 12. 2017
Nové deriváty ifenprodilu selektivně ovlivňující GluN2B podjednotku NMDA receptoru
Financováno z:
Interní grantové soutěže FNHK
Řešitelé:
Kamil Kuča, Katarína Špilovská, Jan Korábečný, Eugenie Nepovimová, Ondřej Soukup, Markéta Benková
Anotace projektu:
Cílem projektu je design, syntéza a in vitro evaluace nových potenciálně selektivních GluN2B NMDAR antagonistů vázající se na NTD. Racionalita předkládaného výzkumu je podložena našimi předběžnými daty, kdy byla při screeningu objevena molekula 7-phenoxytakrinu selektivně ovlivňující právě GluN2B receptorovou podjednotku (IC50 = 23 µM, nepublikovaná data). V první fázi projektu bude provedena in silico vazebná studie do NTD GluN2B (krystalografická struktura je k dispozici z Protein Data Bank - http://www.rcsb.org; PDB ID: 5B3J). Po zjištění vazebného místa 7-phenoxytakrinu bude proveden překryv s ifenprodilem vedoucí k návrhu nových struktur s potenciálně vyšší vazebnou afinitou k NTD GluN2B. Zohledněny budou rovněž fyzikálně-chemické parametry (logP, pKa, solubilita, PSA, Mw apod.). Celý koncept bude následně ověřen organickou syntézou, kdy předpokládáme okolo 3-5 nových sloučenin. Celý projekt bude završen in vitro evaluací nově připravených derivátů pro zjištění afinity na GluN2B.
Doba řešení:
1. 1. 2017 - 31. 12. 2017
Nové látky ovlivňující pattern recognition receptory jako potenciální adjuvans/imunonmodulátory
Financováno z:
Interní grantové soutěže FNHK
Řešitelé:
Jan Honegr, Dávid Maliňák, Rafael Doležal, Markéta Benková
Anotace projektu:
Cílem projektu je identifikovat nové potenciální ligandy receptorů TLR4 s aktivitou řádově srovnatelnou s MPLA (standard pro TLR4) pomocí in-vitro testování metodou screeningu na buněčných liniích stabilně exprimujících humánní TLR4. Tyto látky byly navrženy pomocí metod farmaceutické chemie s využitím počítačového modelování - dockovaním do aktivního místa receptoru. Úspěšné látky budeme syntetizovat a testovat na cytotoxicitu a vnitřní aktivitu na buněčných liniích exprimujících patřičný receptor.
Doba řešení:
1. 1. 2017 - 31. 12. 2017
Vysokoprůtokové LC-MS analýzy pro klinickou proteomiku
Financováno z:
Interní grantové soutěže FNHK
Řešitelé:
Juraj Lenčo, Kristýna Pimková, Markéta Benková
Anotace projektu:
Cílem projektu je ještě více zkvalitnit zatím prováděné vysokoprůtokové globální proteomické LC-MS analýzy, tak aby se svou výtěžností maximálně vyrovnaly zatím standardním ale bohužel málo robustním nanoLC-MS analýzám. Věnovat se budeme jevy, které ovlivňují jak chromatografickou účinnost, tak MS výtěžnost jako jsou disperze píků, teplotní nesoulad mobilních fází vstupujících do kolony, efektivita ionizace, acidifikátory mobilních fází. Jen opravdu důkladně optimalizované a proto dostatečně výtěžné LC-MS proteomické analýzy mají šanci uspět v klinickém prostředí, kde je kladen důraz na rychlost, robustnost a stabilitu.
Doba řešení:
1. 1. 2017 - 31. 12. 2017
Zavedení nových metod pro in vitro hodnocení potenciálních léčiv Alzheimerovy choroby
Financováno z:
Interní grantové soutěže FNHK
Řešitelé:
Vendula Šepsová, Daniel Jun, Martina Hrabinová, Ondřej Soukup, Jana Janočková
Anotace projektu:
Budou zavedeny dvě nové screeningové metody, umožňující zachytit a in vitro hodnotit látky, ovlivňující významné terapeutické cíle AD. Primárním cílem je vyvinout alternativní metodiku pro měření agregace Aβ resp. její inhibice. Proto bude zavedena spektrofotometrická metoda využívající barvivo červeň Kongo, které je mimo jiné používáno v histopatologii k diagnostice amyloidóz. Dále bylo prokázáno, že agregace Aβ závisí také na schopnosti inhibitoru AChE vázat se do PAS enzymu AChE. Tuto interakci je možné sledovat druhým zaváděným testem pomocí ThT. Sekundárním záměrem projektu je otestovat po úspěšné validaci zavedených metod skupinu vybraných inhibitorů AChE.
Doba řešení:
1. 1. 2017 - 31. 12. 2017
Rozšíření baterie in vitro testů pro hodnocení potenciální neurodegenerativních terapeutik
Financováno z:
Interní grantové soutěže FNHK
Řešitelé:
Ondřej Soukup, Rafael Doležal, Jana Janočková, Markéta Pasdiorová, Eugenie Nepovimová, Jan Korábečný
Anotace projektu:
Primárním cílem je zavést nové metodiky na pracoviště CBV. Historicky se pracoviště zaměřovalo na vývoj a testování nových léčiv v souladu s cholinergní teorií léčby (inhibice AChE, interakce s muskarinovými receptory). Nově byly etablovány metodiky zaměřené na inhibici beta-sekretázy či prolyloligopeptidázy, které se ukázali jako aktivní pro spolupráce a z nich vyplývající publikační výstupy. Nově navrhované testy (inhibice GSK-3beta, antiagregační aktivita vůči Abeta 1-24, a interakce s nikotinovými receptory), tak rozšíří stávající spektrum testů a know-how pracoviště, tak aby mohlo být využito těchto směrů v hledání a vývoji nových léčiv. Tyto nové testy potom bude nabízeno formou spolupráce jiným výzkumným subjektům či formou služeb soukromým firmám. Sekundárním cílem je otestování nových řad potenciálních léčiv na zmíněnou antiagregační aktivitu Abeta a inhibici GSK3beta.
Doba řešení:
1. 1. 2016 - 31. 12. 2016
Studium farmakokinetiky fragmentů donepezilu - identifikace části molekuly zodpovědné za přestup léku přes HEB
Financováno z:
Interní grantové soutěže FNHK
Řešitelé:
Martin Mžik, Jana Žďárová Karasová, Jan Korábečný, Viktor Voříšek, Vladimír Palička, Rafael Doležal
Anotace projektu:
Primárním cílem tohoto projektu je in vivo hodnocení toho,zda-li je efekt aktivního transportu přes HEB a jeho potencionální kumulace v CNS vázán na některou z části molekuly donepezilu. Protože začlenění celé molekuly tohoto léčiva do nově připravených inhibitorů AChE není z hlediska farmakodynamického účinku nejvýhodnější.
Námi zjištěná data by mohla být využita v syntéze nových inhibitorů AChE. Začlenění části molekuly dává z hlediska syntézy a farmakodynamiky větší možnosti přípravy nových inhibitorů se zlepšením prostupu a setrvání v CNS a tedy i potencionálně lepších léčebných účinkem.
Doba řešení:
1. 1. 2016 - 31. 12. 2016
Cyclophilin D jako nový terapeutický cíl pro léčbu Alzheimerovy nemoci
Financováno z:
Interní grantové soutěže FNHK
Řešitelé:
Kamil Musílek, Ondřej Benek, Lukáš Hroch, Martina Hrabinová, Daniel Jun
Anotace projektu:
Primárním záměrem předkládaného projektu je testování enzymu cyclophilin D (CypD) jako potenciálního cíle pro terapeutické ovlivnění Alzheimerovy nemoci. Za tímto účelem budou připraveny nové sloučeniny potenciálně ovlivňující aktivitu CypD a následně budou otestovány in vitro spolu se standardy (cyklosporin A, antamanid, apod.). Tato metodika přímo navazuje na probíhající projekt AZV, který se zabývá přípravou modulátorů enzymu amyloid-vázající alkoholdehydrogenasy (ABAD). Nová metodika pro CypD tak rozšíří výběr testovaných mitochondriálních enzymů, u kterých je předpokládáno, že se účastní progrese Alzheimerovy nemoci, a umožní získat první výsledky pro další externí projekt.
Doba řešení:
1. 1. 2016 - 31. 12. 2016
Vývoj inhibitorů ataxia telangiectasia and Rad3-related protein kinasy (ATR) odvozených od kofeinu pro terapii nádorových onemocnění
Financováno z:
Interní grantové soutěže FNHK
Řešitelé:
Jan Korábečný, Martin Andrš, Lukáš Górecki, Aleš Tichý, Rafael Doležal, Eugenie Nepovimová
Anotace projektu:
Cílem předkládaného projektu je příprava nových potenciálních inhibitorů ATR kinasy. Vycházíme z inhibičních vlastností kofeinu a ostatních příbuzných inhibitorů selektivních k ATR. V této návaznosti budou běžnými syntetickými postupy připraveny nové solubilní deriváty se zaměřením na zvýšení jejich selektivity vůči ATR. Tato analoga budou následně in vitro otestovány participujícím pracovištěm Lékařské fakulty Univerzity Karlovy v Hradci Králové a Fakulty Vojenského Zdravotnictví Univerzity Obrany a bude provedena kvantitativní analýza vztahu mezi strukturou a biologickou aktivitou. Stanovení biologické potenciálu látek vůči ATR bude doplněno ověřením cytotoxicity na vybraných buněčných liniích. Nejúspěšnější deriváty se stanou podkladem pro další preklinické testování.
Doba řešení:
1. 1. 2016 - 31. 12. 2016
Vývoj insekticidů cílených na acetylcholinesterasu
Financováno z:
Interní grantové soutěže FNHK
Řešitelé:
Daniel Jun, Jan Korábečný,Veronika Hrabcová, Eugenie Nepovimová, Dávid Maliňák, Eva Mezeiová
Anotace projektu:
Cílem projektu je příprava nových selektivních inhibitorů hmyzí acetylcholinesterasy. Tyto insekticidy nové generace by měly pomoci zabránití šíření malárie a dalších hmyzem přenášených onemocnění. Vycházíme ze struktur nedávno publikovaných [1] v kombinaci s nově načepranými poznatky z nedávno proběhlé conference “12th International Meeting on Cholinesterases-Sixth International Conference on Paraoxonases”. Nové látky budou testovány in vitro pomocí Ellmanovy metody na lidském a hmyzím enzymu. [2] Následně proběhne porovnání odezvy a vyhodnocením selektivity látek. Na závěr bude vyhotovena strukturně‑afinitní studie (SAR) a nejúspěšnější deriváty se stanou podkladem pro další studii.
Doba řešení:
1. 1. 2016 - 31. 12. 2016
Výzkum nových modulátorů orexinového receptoru 2 kombinací technik in silico a in vitro
Financováno z:
Interní grantové soutěže FNHK
Řešitelé:
Jan Honegr, Rafael Doležal, Ondřej Soukup, Jana Janočková, Markéta Pasdiorová, Eugenie Nepovimová
Anotace projektu:
Cílem projektu je in-silico otestovat 5000 kandidátních látek na vnitřní aktivitu na orexinový receptor OX2R a z nich vybrat 10 látek s vysokou vypočtenou vnitřní aktivitou. 10 vybraných struktur zakoupit a in vitro ověřit zda vykazují agonistickou nebo antagonistickou aktivitu na receptoru OX2R. U látek které vykáží vnitřní aktivitu na OX2R otestovat schopnost průchodu přes hematoencefalickou bariéru a cytotoxicitu na savčích buněčných liniích.
Na základě výsledků in vitro navrhnoutin-silico skupinu účinnějších derivátů a provést in silico QSAR studii.
Doba řešení:
1. 1. 2016 - 31. 12. 2016
Kvarterní amoniové soli jako nové dezinfekční prostředky
Financováno z:
Interní grantové soutěže FNHK
Řešitelé:
Ondřej Soukup, Lenka Ryšková, Lenka Hobzová, Daniel Jun, Dávid Maliňák, Šárka Salajková
Anotace projektu:
Cílem tohoto projektu je připravit 20 nových, dosud nepublikovaných, látek ze skupiny ve vodě rozpustných kvarterních amoniových solí s vysokým potenciálem proti gramnegativním a grampozitivním bakteriím a proti kvasinkovým a vláknitým houbám. Z těchto látek potom připravit směsný přípravek, který by pokrýval celé spektrum testovaných patogenů (účinnost). Bezpečnost těchto látek by byla testována cytotoxickým hodnocením na buněčné linii a porovnána s běžně užívaným dezinfekčním standardem-benzalkoniem (bezpečnost).
Doba řešení:
1. 1. 2015 - 31. 12. 2015
Identifikace potencionálních proteinových markerů délky latence u těhotných s neinfekčním PPROM
Financováno z:
Interní grantové soutěže FNHK
Řešitelé:
Juraj Lenčo, Marian Kacerovský, Dai Long Vu, Vojtěch Tambor
Anotace projektu:
Cílem projektu je pomocí nástrojů proteomiky charakterizovat rozdíly proteinového složení plodové vody u žen s neinfekčním PPROM a krátkou latencí (porod do 48 hodin po odtoku plodové vody) a od žen s neinfekční PPROM a dlouhou latenci (porod za více než 7 dní po odtoku plodové vody).
Doba řešení:
1. 1. 2015 - 31. 12. 2015
Imunomodulátory – potenciální adjuvans na bázi ligandů receptoru TLR8
Financováno z:
Interní grantové soutěže FNHK
Řešitelé:
Jan Honegr, Dávid Maliňák, Rafael Doležal, Markéta Pasdiorová, Roman Prymula
Anotace projektu:
Cílem projektu je identifikovat nové potenciální ligandy receptorů TLR8 pomocí in-vitro testování na buněčné linii stabilně exprimující humánní receptor TLR8.Látky pro testování navrhneme s využitím metod počítačového modelování a principů medicinální chemie. Navržené látky budou odvozeny od modelových struktur Imadazochinolinůa dockovány do aktivního místa receptoru. Látky s dobrou vypočtenou vnitřní aktivitou budeme syntetizovat a ověříme jejich vnitřní aktivitu in vitro. Syntetizované látky otestujeme na cytotoxicitu. Souběžně budeme paralelně in-vitro (na buněčné linii) testovat netoxické a málo toxické zástupce různých strukturních typů sloučenin z rozsáhlé knihovny látek CBV na vnitřní aktivitu na TLR8.
Doba řešení:
1. 1. 2015 - 31. 12. 2015
Studium metabolických přeměn potenciálních antialzheimerik s využitím LC-MS
Financováno z:
Interní grantové soutěže FNHK
Řešitelé:
Rafael Doležal, Jana Žďárová Karasová, Ondřej Soukup, Markéta Pasdiorová, Jan Honegr
Anotace projektu:
Během posledních několika let byl na CBV realizován design, syntéza a in vitro hodnocení řady slibných kandidátů na léčiva AD. Jedná se zejména o látky odvozené od takrinu, reverzibilně inhibující acetylcholinesterasu, a deriváty benzothiazolu, inhibující ABAD. Významné výsledky v in vitro experimentech vedly k podání patentové přihlášky na registraci 10 chemických látek. Cílem tohoto projektu je navázat na předchozí etapy výzkumu a analyzovat chování těchto 10 látek v metabolických experimentech. V rámci projektu bude provedena in vitro modifikace léčiv pomocí LHM, během níž se předpokládá vznik derivátů odpovídajících první fázi metabolizace po orálním podání. Na biochemickou část naváže bioanalytická fáze, jejímž cílem bude vyvinout citlivou analytickou LCMS/MS metodu a pomocí ní identifikovat vzniklé metabolity.
Doba řešení:
1. 1. 2015 - 31. 12. 2015
Inhibitory DNA-dependentní protein kinasy odvozených od 2-morpholinochinazolin-4-onu v terapii nádorových onemocnění
Financováno z:
Interní grantové soutěže FNHK
Řešitelé:
Jan Korábečný, Martin Andrš, Petr Jošt, Ondřej Soukup, Kamil Kuča
Anotace projektu:
Cílem projektu je příprava nových potenciálních inhibitorů DNA-PK. Vycházíme z inhibičních vlastností LY294002 a jeho derivátů selektivních k DNA-PK. V této návaznosti budou běžnými syntetickými postupy připraveny nové deriváty se zaměřením na zvýšení jejich selektivity vůči DNA-PK a rozpustnosti. Tato analoga bodou následně in vitro otestovány participujícím pracovištěm UMG v Praze a bude vyhotovena strukturně-aktivitní studie následována cytotoxickým stanovením na vybraných buněčných liniích. Nejúspěšnější deriváty se stanou podkladem pro další preklinické testování.
Doba řešení:
1. 1. 2015 - 31. 12. 2015
Vývoj nových léčiv pro terapii Alzheimerovy choroby: spojení inhibitorů cholinesteras s antioxidanty
Financováno z:
Interní grantové soutěže FNHK
Řešitelé:
Daniel Jun, Jan Korábečný, Petr Jošt, Eugenie Nepovimová, Kateřina Babková, Martina Hrabinová
Anotace projektu:
Cílem projektu je příprava nových potenciálních inhibitorů AChE, které ve své molekule budou obsahovat rovněž antioxidačně působící sloučeninu. Za strukturní základ inhibitoru AChE bude zvolen takrin (takrin, 6-chlortakrin nebo 7-methoxytakrin) v kombinace s derivátem vitaminu E (trolox) nebo kyseliny lipoové. Tyto MTDL budou následně biologickým screeningem validovány pro svůj potenciál v terapii AD (inhibice AChE/BChE, antioxidační potenciál). Nejúspěšnější deriváty se stanou podkladem pro další preklinické testování.
Doba řešení:
1. 1. 2015 - 31. 12. 2015
Povrchově aktivní sloučeniny jako potenciální desinfekční agens
Financováno z:
Interní grantové soutěže FNHK
Řešitelé:
Kamil Musílek, Vladimír Buchta, Daniel Jun, Kamil Kuča, Ondrej Soukup, Marcela Vejsová
Anotace projektu:
Cílem projektu je příprava 20 nových povrchově aktivních sloučenin a zjištění jejich účinků. Připravené sloučeniny budou charakterizovány (určení jejich struktury a čistoty). Sloučeniny budou testovány na antimikrobní aktivitu pomocí různých metodik. U vybraných sloučenin s perspektivní antimikrobní aktivitou budou dále testovány cytotoxické účinky pomocí zavedených metodik. Výsledkem projektu by měla být série povrchově aktivních sloučenin s determinovanou antimikrobní a cytotoxickou aktivitou, která určuje perspektivu daných povrchově aktivních sloučenin pro desinfekci povrchů nebo kůže.
Doba řešení:
1. 1. 2014 - 31. 12. 2014
Proteomická analýza mozkomíšního moku a roztroušené sklerózy a klinicky izolovaného syndromu
Financováno z:
Interní grantové soutěže FNHK
Řešitel:
Martin Vališ, David Doležil, Vojtěch Tambor, Juraj Lenčo, Pavel Šťourač, Pavel Kunc
Anotace projektu:
Cílem tohoto projektu je nalézt změny v nízkomolekulárním segmentu proteomu CSF a zjistit jaké nativní peptidy a v jakém množství se nacházejí v mozkomíšní moku mezi pacienty s relaps-remitentní formou roztroušené sklerózy (RRMS) a klinicky izolovaným syndromem s vysokým rizikem rozvoje RSM oproti zdravé populaci. Takovéto polypeptidy mohou být potenciální nové diagnostické markery a mohou přispět k novým poznatkům o patogenezi onemocnění. Pro hledání rozdílů mezi jednotlivými skupinami budou použity moderní proteomické přístupy pro charakterizaci nízkomolekulárního segmentu tělesných tekutin.
Doba řešení:
1. 1. 2014 - 31. 12. 2014
Řešitel:
Martin Vališ, Oldřich Vyšata, Jana Žďárová Karasová, Rafael Doležal
Anotace projektu:
Primárním cílem této studie je zavést dostatečně citlivou a reprodukovatelnou metodu stanovení donepezilu v biologických vzorcích (plasma, mozkomíšní mok, popř. moč) pro její následné využití v preklinických a klinických studiích. Tato metoda by měla splňovat tato základní kritéria: snadnost provedení, spolehlivost odečtu výsledků, vysokou citlivost, dostupnost v základním laboratorním vybavení (HPLC s UV detektorem) a měla by být zároveň levná.
Metoda bude ihned využita k stanovení koncentrací donepezilu v biologických vzorcích (plasma, mozkomíšní mok) v rámci klinické studie. Budou sledovány změny koncentrací tohoto léčiva po p. o. aplikaci ve vybraných časových intervalech mezi jednotlivými dávkami a jejich vliv na aktivitu acetylcholinesterasy.
Doba řešení:
1. 1. 2014 - 31. 12. 2014
Diagnostika nežádoucích účinku nově syntetizovaných léčiv ze skupiny inhibitorů acetylcholinesterázy; vliv na myoelektrickou aktivitu žaludku u prasat
Financováno z:
Interní grantové soutěže FNHK
Řešitelský tým:
Jan Bureš. Marcela Kopáčová, Martin Kuneš, Ilja Tachecí, Jaroslav Květina, Kamil Musílek
Abstrakt:
Inhibitory acetylcholinesterázy (AChE) patří mezi nejúčinější klinicky ověřená psychofarmaka v terapii poruch kognitivnich funkci. Mezi tato onemocneni patri i Alzheimerova choroba, jejiz vyznamnym projevem je demence. Součástí patogeneze demence je cholinergní deficit částečně vlivem inhibice acetylcholinesterázy. Nepřímý parasympatomimetický účinek těchto látek zvyšuje koncentraci acetylcholinu na synapsích a umožňuje zlepšení kognitivních funkcí pacienta. Zavedení látek ze skupiny inhibitorů AChE do klinické praxe předstvuje podstatný předěl v terapii demence. V současné době jsou indikovány z této skupiny léčiv donepezil, rivastigmin a galantamin. Existuje však celá řada nežádoucích účinků spojených s úžíváním těchto farmak, včetně vlivu na gastrointestinální trakt. Uvádí sebolest břicha, průjmy, dyspepsie, indigesce a další. Užívání je kontraindikováno u pacientů s anamanézou či predispozicí vředové choroby, u pacientů s gastrointestinální obstrukcí.
Doba řešení:
1. 1. 2014 - 31. 12. 2014
Adjuvans - imunopotenciátory na bázi ligandů TLR receptorů
Financováno z:
Interní grantové soutěže FNHK
Řešitelský tým:
Jan Honegr, Dávid Maliňák, Ondřej Soukup, Rafael Doležal, Kamil Kuča, Roman Prymula
Abstrakt:
Cílem projektu je identifikovat nové potenciální ligandy receptorů TLR2 a TLR4 s aktivitou řádově srovnatelnou s MPL (standard pro TLR4) nebo PamCSK4 (standard pro TLR2) pomocí in-vitro testování metodou screeningu na buněčných liniích stabilně exprimujících humánní receptor TLR2 nebo TLR4. Tyto látky budou navrženy pomocí metod farmaceutické chemie s využitím počítačového modelování - dockovaním do aktivního místa receptoru. Úspěšné látky budeme syntetizovat a testovat na cytotoxicitu a vnitřní aktivitu na buněčných liniích exprimujících patřičný receptor. Souběžně budeme paralelně in-vitro (na buněčné linii) testovat netoxické a málo toxické zástupce různých strukturních typů sloučenin z rozsáhlé knihovny látek CBV na vnitřní aktivitu na TLR.
Doba řešení:
1. 1. 2014 - 31. 12. 2014
Farmakokinetika nově vyvíjených kognitiv pro terapii neurodegenerativních onemocnění
Financováno z:
Interní grantové soutěže FNHK
Řešitelský tým:
Martin Kuneš, Jaroslav Květina, Kamil Musílek, Kamil Kuča, Jana Žďárová-Karasová
Abstrakt:
Inhibitory acetylcholinesterázy (AChE) patří mezi nejúčinější klinicky ověřená psychofarmaka v terapii poruch kognitivnich funkci. Mezi tato onemocneni patri i Alzheimerova choroba, jejiz vyznamnym projevem je demence. Součástí patogeneze demence je cholinergní deficit částečně vlivem inhibice acetylcholinesterázy. Nepřímý parasympatomimetický účinek těchto látek zvyšuje koncentraci acetylcholinu na synapsích a umožňuje zlepšení kognitivních funkcí pacienta. Zavedení látek ze skupiny inhibitorů AChE do klinické praxe předstvuje podstatný předěl v terapii demence. Při vývoji nově vyvíjených léčiv je třeba znát farmakokinetické profily po podání do organismu a definovat tak terapeutický režim daného léčiva.
Doba řešení:
1. 1. 2014 - 31. 12. 2014
Zhodnocení farmakokinetických vlastností nové lékové formy s obsahem cytostatik platinové řady
Financováno z:
Interní grantové soutěže FNHK
Řešitelský tým:
Martin Kuneš, Jaroslav Květina, Kamil Kuča, Rafael Doležal, Jana Žďárová-Karasová, Michal Pavlík
Abstrakt:
Kolorektální karcinom patří celosvětově k nejrozšířenějším typům rakovinného onemocnění s vysokým stupněm mortality. Terapie antineoplastiky řady platinových cytostatik patří mezi nejúčinnější léčebnou medikaci současnosti. Jejich nevýhodou je rostoucí rezistence nádorových buněk, systémová toxicta, neuropatie. Současná medikace sestává z opakovaného intravenózního podávání infúze s obsahem účinné látky. Recentní cílení na vývoj perorální lékové formy by z pohledu pacienta představovalo přijatelnější dávkovací a aplikační režim, eliminaci nežádoucích účinků a zároveň přímé "dodání" léčiva k místu působení, tj, distálních partií trávicího traktu. Vývoj takové lékové formy, která by splňovala nároky definované jednak fyzikálně-chemickými vlastnostmi léčivé látky, jednak rezistencí vůči různým hodnotám pH při pasáži GIT či mikrobiální mikroflóře závisí v nalezení vhodného postupu technologické přípravy takové lékové formy.
Doba řešení:
1. 1. 2014 - 31. 12. 2014
Nové inhibitory acetylcholinesterasy odvozené od 7-MEOTA
Financováno z:
Interní grantové soutěže FNHK
Řešitel:
Martin Mžik, Viktor Voříšek, Vladimír Palička, Jana Žďárová Karasová, Jan Korábečný, Katarina Špilovská
Anotace projektu:
V rámci tohoto projektu budou hodnoceny základní farmakokinetické parametry nově připravených centrálně působících inhibitorů acetylcholinesterasy (absorpce, distribuce do centrálního kompartmentu, eliminace a metabolity prvního řádu). Toto hodnocení bude probíhat in vivo (samec potkana, kmen Wistar) po intramuskulární aplikaci. Na základě předcházejících in silico, in vitro a ex vivo testů budou vybrány dva nejperspektivnější kandidáti ze skupiny KS látek. Jedná se o nově připravené duálně působící inhibitory AChE.
Pro stanovení reálných koncentrací v biologických vzorcích bude zavedena nová metoda úpravy vzorků a stanovení pomocí vysokoúčinné kapalinové chromatografie ve spojení s hmotnostní spektrometrií (LC-MS).
Doba řešení:
1. 1. 2014 - 31. 12. 2014
Pozitivní alosterické modulátory muskarinových M1 receptorů
Financováno z:
Interní grantové soutěže FNHK
Řešitelé:
Ondřej Soukup, Daniel Jun, Jan Korábečný, Eugenie Nepovímová, Vendula Šepsová
Anotace projektu:
Cílem projektu je připravit přibližně 24 triazolových a tetrazolových derivátů, jakožto potenciálních léčiv Alzheimerovy choroby, u kterých lze očekávat agonistickou aktivitu na muskarinové M1 receptory a dále účinnost
ve smyslu působení na více cílů (ve smyslu multi-target-directed ligands). Konkrétně, in vitro bude stanoven agonistický účinnek na M1 receptory, jeho mechanismu a schopnost inhibovat acetylcholinesterazu a u nejslibnějších kandidátů bude orientační toxicita stanovena formou cytotoxicit. Dalším cílem je zavést novou metodiku (PAMPA assay) pro stanovení schopnosti přecházet hematoencefalickou bariéru, jakožto základní předpoklad pro léčivo působící na centrální nervovou soustavu.
Doba řešení:
1. 1. 2014 - 31. 12. 2014
Monokvartérní reaktivátory acetylcholinesterasy jako centrálně účinná antidota organofosforových inhibitorů
Financováno:
Interní grantové soutěže FNHK
Řešitelé:
Jan Korábečný, Ondřej Soukup, Lukáš Werner, Daniel Jun, Rafael Doležal, Veronika Hrabcová
Anotace projektu:
Současná terapie otrav nervově paralytickými látkami a organofosforovými pesticidy je založena na kombinaci anticholinergik (atropin), antikonvulziv (diazepam) a reaktivátorů acetylcholinesterasy (AChE) na bázi pyridiniových aldoximů (obidoxim, HI-6). Žádný z aldoximů není univerzální a je schopný reaktivovat pouze AChE inhibovanou některými inhibitory. Protože obsahují kvarterní dusíkový atom, jejich centrální působení je v důsledku nízké permeace hematoencefalickou bariérou (HEB) omezené. Případná otrava pak v CNS může způsobit chronická postižení. Z těchto důvodů neustále pokračuje vývoj nových antidot. Cílem projektu je vývoj nových, centrálně působících reaktivátorů AChE. Budou připraveny dvě látky spojující ligand, vážící se v periferním anionickém místě AChE s reaktivační částí, obsahující 3-hydroxypyridin-2-aldoximové uskupení. Jejich účinnost bude validována in vitro a in vivo experimenty, čímž bude zjištěna jejich bezpečnost, farmakokinetika a schopnost prostupovat HEB.
Doba řešení:
1. 1. 2014 - 31. 12. 2014
Non-cholinergní terapeutika pro léčbu Alzheimerovy choroby
Grantová agentura:
Interní grantová soutěž
Řešitelský tým:
Ondřej Soukup, Daniel Jun, Kamil Musílek, Jan Korábečný, Ondřej Benek, Vendula Šepsová
Anotace projektu:
Primárním cílem je zavést nové metodiky na CBV. Do teď se pracoviště zaměřovalo na vývoj nových léčiv v souladu s cholinergní teorií léčby. Nové směry (BACE1, ABAD a POP) tak rozšíří stávající know-how CBV, tak aby mohlo být využito nových směrů v hledání nových léčiv. To potom bude nabízeno formou spolupráce jiným výzkumným subjektům či formou služeb soukromým firmám. Dalším cílem je pak zmapování necholinergních přístupů v léčbě AD pro návrh a přípravu vlastních látek. Fyzickým výstupem pak bude min. 20 nových chemických individuí, která budou novými metodikami otestována. Vytipováni tak budou slibní kandidáti, na jejichž další výzkum resp. strukturní obměny budou podány další projekty. Zvážena bude také patentová ochrana těchto
látek.
Doba řešení:
1. 1. 2013 - 31. 12. 2013
Grantová agentura:
Interní grantová soutěž FNHK
Řešitelský tým:
Filip Gabalec, Vojtěch Tambor, Juraj Lenčo, Jan Čáp
Anotace projektu:
Adenomy hypofýzy tvoří asi 10 % intrakraniálních tumorů a dle metaanalýzy radiologických studií je jejich prevalence asi 22 %. Přibližně u 1/3 adenomů chybí příznaky z hypersekrece některého z hypofyzárních hormonů - Tyto adenomy nazýváme klinicky afunkčními (KAA). K úplnému odstranění vede samotná operace makroadenomu málokdy a často zůstává residuum. K recidivě růstu nádoru dochází v 11 až 46 %. Bez známek rekurence tumoru zůstává 5 let po operaci asi 80 % nemocných. Vyšší hodnoty 87 % je dosaženo při zdánlivě kompletním odstranění, při ponechaných zbytcích klesá na 68 %. Přesvědčivý marker pro zhodnocení rizika recidivy však nebyl dosud objeven. Cílem projektu je porovnání proteinového složení klinicky afunkčních adenomů (KAA) bez progrese a s progresí po operaci. Pro hledání rozdílů mezi oběma skupinami použijeme moderních proteomických přístupů. Výsledek kvantitativní proteomické analýzy – proteiny s rozdílnými hladinami mezi oběma skupinami - bude sloužit jako podklad pro žádost pro grantovou agenturu v ČR nebo zahraničí.
Doba řešení:
1. 1. 2013 - 31.12. 2013
Vliv chronické expozice organofosfátovým pesticidům na změny v mozku a jejich souvislost s Alzheimerovou chorobou
Grantová agentura:
Interní grantová soutěž FNHK
Řešitelský tým:
Daniel Jun, Kamil Kuča, Vojtěch Tambor, Juraj Lenčo, Ondřej Soukup
Anotace projektu:
V projektu bude ověřena hypotéza, zda a) organofosforový pesticid vyvolá při subchronické perorální expozici nízké dávce v délce 90 dní pozorovatelné změny v expresi proteinů v mozku laboratorního potkana a b) zda jsou tyto případné změny odpovídají či podobné změnám pozorovaným obecně u neurodegenerativních onemocnění a ACH. Na základě získaných výsledků bude podán projekt zkoumající uvedenou problematiku ve větší šíři, tj. v delším časovém období a u více typů pesticidů (karbamáty, pyrethroidy apod.)
Doba řešení:
1. 1. 2013 - 31.12. 2013
Vývoj nových Adjuvans
Financováno z:
Interní grantová soutěž FNHK
Řešitelský tým:
Kamil Kuča, Daniel Jun, Roman Prymula, Ondrej Soukup, Pavel Kosina, Jan Honegr
Abstrakt:
Cílem projektu je zavést nový směr výzkumu v rámci FNHK. V rámci projektu jsme provedli pilotní studii výběru nového adjuvancia ze skupiny nosičů antigenu. Otestovali jsme 5 nových povrchově aktivních látek na cytotoxicitu. Z nich jsme vybrali, na základě kombinace výsledků cytotoxicity a fyzikálně chemických vlastností, 2 kandidátní látky a ty jsme následně podrobili formulaci do lékové formy s antigenem. V současnosti nejstabilnějsí a nejbezpečnější formulaci testujeme in-vivo na schopnost vyvolat zvýšenou protilátkovou odpověď na antigen.
Doba řešení:
1.1. 2013 - 31.12. 2013
Kofeinové inhibitory ATM kinasy v terapii nádorových onemocnění
Grantová agentura:
Interní grantová soutěž FNHK
Řešitelský tým:
Jan Korábečný, Ondřej Benek, Vendula Šepsová, Ondřej Soukup, Rafael Doležal
Anotace projektu:
Ataxia-telangiectasia mutovaná (ATM) je DNA dependentní serin/threonin proteinová kinasa. ATM působí současně jako senzor i zesilovač poukazující na poškození při zlomech dvoušrobovice DNA. Je nezbytnou součástí buněčného cyklu v regulaci S fáze a účastní se přechodu buňky mezi G2 a M fází. Rovněž se přímo účastní pochodů vedoucí k opravě DNA a je taktéž indikátorem poškození DNA jako odezva oxidačního stresu. Vlastní narušení ATM vede k dědičnému, urodegenerativnímu onemocnění nazývanému ataxia-telangiectasia (A-T, někdy též Louis-Barův syndrom). Mezi symptomy patří zeslabení činnosti mozku, zejména těch oblastí, které jsou zodpovědné za koordinaci a pohyb, dále oslabení činnosti imunitního systému a v neposlední řadě zvýšená náchylnost ke vzniku zhoubného bujení. A-T mimo jiné vyvolává přecitlivělost buněk vůči ionizujícímu záření. Jedná se o poměrně vzácné onemocnění, které se vyskytuje v populaci u jednoho jedince na 40000-100000 zdravých. Progresi Louis-Barova syndromu lze potlačit využitím přímých ATM inhibitorů. Mezi ně patří mimo jiné i kofein, který in vitro vykázal silné inhibiční působení vůči tomuto enzymu. Nevýhodou kofeinu je, že při různých koncentracích zesiluje cytotoxické působení infračerveného záření a dalších DNA-poškozujících chemických agens. Hledání nových, biologicky aktivních kofeinových derivátů s nižší toxicitou v kombinaci s DNA-poškozujícímu látkami (např. adriamycin, mitoxantron) tak může představovat úspěšnou cestu pro léčbu rakoviny. Cílem projektu je příprava nových potenciálních inhibitorů ATM kinasy. V této naváznosti budou běžnými syntetickými postupy připraveny nové deriváty kofeinu. Tato analoga bodou následně in vitro otestovány participujícím pracovištěm UMG v Praze a bude vyhotovena strukturně-aktivitní studie následována cytotoxickým stanovením na vybraných buněčných liniích. Nejúspěšnější deriváty se stanou podkladem pro další preklinické testování.
Doba řešení:
1. 1. 2013 - 31. 12. 2013
Nízké dávky pesticidů a jejich vliv na CNS: model neurodegenerativních onemocnění
Grantová agentura:
Interní grantová agentura FNHK
Řešitel:
Daniel Jun, Kamil Kuča, Vojtěch Tambor, Ondřej Soukup, Juraj Lenčo
Anotace projektu:
Cílem projektu je studovat vliv subchronického působení organofosforového pesticidu na expresi proteinů v mozku laboratorního potkana, prostřednitvím proteomických metod a porovnávání nalezené změny s již známými změnami, ke kterým dochází u neurodegenerativních onemocnění.
Doba řešení:
1. 1. 2013 - 31. 12. 2013