Bazotesty

Laboratorní vyšetření hypersenzitivity  na léky

(IgE i non-IgE mediované).

Vyšetření se provádí testem aktivace bazofilů (tzv. bazotest) a testem blastické transformace lymfocytů (LTT) ve dnech úterý, středa, čtvrtek. Pacient se dostaví k odběru na  lačno. Pro výpovědní hodnotu laboratorního testu je nezbytné, aby pacient měl  včas vysazeny léky ovlivňující reaktivitu buněk ( antihistaminika 3 dny před, systémové kortikosteroidy 7 dní před odběrem)

Krevní odběr  se provádí nalačno v době od 7, 30 -9,30 hod. na ambulanci ÚKIA. K odběru je třeba přinést řádně vyplněnou žádanku na požadované vyšetření od odesílajícího lékaře se vzorkem léku a udanou silou (koncentrací) léku v tabletě či roztoku. K vyšetření jsou třeba 2 zkumavky heparinové krve (celkem 10 ml).

Maximálně jsou prováděna při jednom vyšetření 4 druhy léků, z kapacitních důvodů laboratoře je možné vyšetřit pouze 3 pacienty v daný den.  Proto je nutné pacienta objednat ke krevnímu odběru a vyšetření na tel.čísle  495 833 983. Žádanky k vyšetření jsou dostupné na www.fnhk.cz./ukia/zadanky  (  jedná se o žádanku „buněčná imunita“).

Indikace k  laboratornímu vyšetření je možná pouze v rámci odbornosti imunologie/alergologie (207). Pokud odesílající lékař z jiného oboru má zájem o toto vyšetření, je možné  objednat pacienta ke konsiliárnímu vyšetření u lékařů ÚKIA FN  HK, kteří  pacienta s lékovou hypersenzitivitou indikují k dalším diagnostickým postupům.

Detekce bazofilů z plné krve pomocí průtokové cytometrie využívá značení CD203c a aktivačního znaku CD63 pomocí monoklonálních protilátek. Bylo prokázáno, že lidské bazofily aktivované in vitro (alergenem nebo anti–IgE protilátkami) prostřednictvím jejich vysokoafinitního receptoru pro IgE, nově exprimují znak CD63 také na své membráně a tato exprese velmi dobře koreluje s jejich degranulací. Inkubace periferní krve s alergenem, značení buněk protilátkami a měření vzorků na průtokovém cytometru trvá cca 3hodiny ( náročnost cca 3600bodů).

Hodnotí se % CD63 pozitivních bazofilů. Pro různé druhy alergenů jsou stanoveny odlišné meze pozitivity:

Inhalační + potravinové alergeny       > 15%
Hmyzí jedy                                    > 10%
Léky                                            >   5%     (stimulační index -SI > 2)

SI = % CD63+ bazofilů po stimulaci alergenem / % CD63+ bazofilů bez stimulace

 LTT je zdlouhavá a pracná metoda, kde je nutné nejprve vyseparovat lymfocyty z periferní krve a po naředění na určitou koncentraci je inkubovat s danými koncentracemi testovaného léku (cca 3hodiny). Po skončení 6denní inkubace se značí jaderná DNA proliferujících buněk a po další inkubaci se vzorky měří na průtokovém cytometru (cca 2,5hodiny). Této náročnosti odpovídá i cena vyšetření. (cca 4000bodů  u 4 léků).

Výsledek je vyjádřený jako stimulační index SI, což je podíl hodnoty proliferační odpovědi vzorku stimulovaného testovanýcm lékem a hodnotou proliferační odpovědi nestimulovaného vzorku. Výsledek do hodnoty SI ≤ 2 hodnotíme jako negativní, SI = 2-3 jako hraniční, SI > 3 je pozitivní. Každý pacient je však posuzovaný individuálně i podle kontroly.