Quantiferon TB a T-spot TB

Quantiferon TB Gold Plus

Je určen k detekci latentní infekce Mycobacterium tuberculosis.

Tento test je zařazen mezi tzv. metody IGRA (Interferon Gamma Releasing Assays). QuantiFERON TB Gold Plus (QFT-Plus) je diagnostický test in vitro s použitím směsi proteinů ESAT-6 a CFP-10, které jsou specifické pro patogenní druhy komplexu Mycobacterium tuberculosis a nevyskytují se ve vakcinačních kmenech BCG, ani v netuberkulózních mykobakteriích.Výjimkou jsou mykobakteria M. kansasii, M. szulgai a M. marinum, která však infekci člověka způsobují zcela výjimečně. Jsou-li přítomny aktivované paměťové T lymfocyty, jsou těmito peptidy stimulovány k tvorbě interferonu gamma. Jeho koncentrace je poté stanovena imunochemicky metodou ELISA.

QFT-Plus obsahuje dvě odlišné zkumavky s antigenem TB: zkumavku TB Antigen 1 (TB1) a zkumavku TB Antigen 2 (TB2). Obě zkumavky obsahují peptidové antigeny ESAT-6 a CFP-10. Zatímco zkumavka TB1 obsahuje peptidy z ESAT-6 a CFP-10, které jsou navrženy ke zjištění buněčných imunitních odpovědí z CD4+ T-pomocných lymfocytů, zkumavka TB2 obsahuje dodatečnou sadu peptidů zaměřenou na indukci odpovědí z CD8+ cytotoxických T-lymfocytů.

Hodnocení

Na výsledkovém listu jsou uvedené naměřené koncentrace interferonu gama [IU/ml] po stimulaci mykobakteriálními antigeny (TB1 a TB2), v kontrolní zkumavce bez antigenu (NIL) a po stimulaci mitogenem (MIT). Na základě těchto naměřených údajů je test dle kritérií doporučených výrobcem vyhodnocen jako negativní, pozitivní, nebo neurčitý.

U pacientů, kterým je aplikována imunosupresivní terapie, může nastat situace, kdy výsledek testu nelze hodnotit pro nedostatečnou schopnost odpovědět na mitogenní podněty. U nemocných s probíhající virovou infekcí, obvykle charakteru infekční mononukleózy, může být abnormálně vysoká odpověď v negativní kontrole. V obou těchto situacích nelze test vyhodnotit a je vydán výsledek „neurčitý“. V případě klinické potřeby doporučujeme u těchto nemocných vyšetřit přítomnost latentní infekce M. tuberculosis testem T – spot.TB.

Negativní výsledek QFT-Plus nevylučuje možnost infekce M. tuberculosis. Falešně negativní výsledky mohou být způsobeny stádiem infekce (např. vzorek získaný před rozvojem buněčné imunitní reakce), komorbidním stavem, který ovlivňuje funkce imunitního systému, nesprávnou manipulací se zkumavkami, nesprávným provedením testu nebo jinými imunologickými proměnnými.

Pozitivní výsledek QFT-Plus by neměl být jediným nebo definitivním základem pro stanovení infekce M. tuberculosis.

Odběr krve na test QuantiFERON-TB Gold Plus

Heparinizovaná krev odebíraná do čtyř speciálních vakuových zkumavek, které na vyžádání dodá laboratoř. Zkumavka se zeleným víčkem (TB1) obsahuje peptidy ke zjištění buněčných imunitních odpovědí CD4+ pomocných T lymfocytů, zkumavka s žlutým víčkem (TB2) obsahuje dodatečnou sadu peptidů indukujících odpověď z CD8+ cytotoxických T lymfocytů, zkumavka s fialovým víčkem (MIT) obsahuje mitogen a zkumavka se šedým víčkem (NIL) obsahuje pouze heparin a slouží jako kontrola.

Spolu se zkumavkami dodáváme i žádanku s podrobnými pokyny k odběru.

Zkráceně se jedná o následující zásady:

• uchovávat prázdné odběrové zkumavky důsledně při 4‑25°C
• odebrat správný objem krve (4 x 1 ml)
• po odběru opakovaným obrácením zkumavky dostat do kontaktu vzorek krve s lyofilizovanými antigeny přítomnými na vnitřním povrchu zkumavky
• zkumavky po odběru uchovávat při teplotě 17‑27°C
• vzorek dopravit do laboratoře k dalšímu zpracování co nejdříve, nejpozději 16 hodin po odběru

T – spot.TB

Detekce latentní infekce Mycobacterium tuberculosis testem T-spot.TB

Metoda stanovení:

separace mononukleárních buněk periferní krve (PBMC) a následný ELISPOT test

Význam stanovení:
Pomocí genomické a proteomické analýzy byly identifikovány proteiny ESAT 6 a CFP10, které jsou specifické pro patogenní druhy komplexu Mycobacterium tuberculosis a nevyskytují se ve vakcinačních kmenech BCG ani v netuberkulózních mykobakteriích. V případě infekce M. tuberculosis má pacient v krvi efektorové Th1 T lymfocyty specifické pro Mycobacterium tuberculosis. Tyto buňky po stimulaci specifickými antigeny ESAT 6 a CFP10 produkují interferon γ. Ten je zachycen monoklonální protilátkou navázanou na dno kultivační jamky. V následném kroku je detekován imunochemicky protilátkou označenou enzymem, který štěpí substrát za vzniku barevného produktu. Výsledkem je barevný spot na dně kultivační jamky. Spoty jsou kvantifikovány pomocí čtecího zařízení.

Tento test je určen k identifikaci nemocných s latentní formou infekce M. tuberculosis. Průkaz latentní formy mykobakteriální infekce je nezbytný u všech osob, u kterých je indikována biologická terapie neutralizující TNFα. Je vhodné vyloučit latentní mykobakteriální infekci i u dalších pacientů, kteří podstupují razantní imunosupresivní (protizánětovou) terapii.

T-spot.TB používáme jako výběrový test u pacientů, u kterých byl výsledek průkazu latentní infekce M. tuberculosis testem Quantiferon neurčitý. Lze jej použít u nemocných již imunosuprimovaných, u kterých by test Quantiferon byl velmi pravděpodobně neúčinný. Testem T-spot.TB se lze pokusit o identifikaci T lymfocytů specifických pro M. tuberculosis i v jiných buněčných suspenzích, např. pleurálním výpotku.

Označení na žádance:
T-spot TB odběr 15 ml heparinizované krve

Vyšetřovaný materiál:
nesrážlivá krev min. 15 ml odebraná do heparinu

Odběr:
sklo nebo plast s úpravou (heparin); vhodný je odběr ráno nalačno, nutné odebrat 2 odběrové zkumavky po 8 ml

Manipulace s materiálem:
Obsah zkumavek se musí opakovaným obrácením promíchat, skladují se při pokojové teplotě ve vertikální poloze, označené datem a časem odběru na žádance. Doprava do laboratoře ihned po odběru, nejdéle však do 13 hodin téhož dne.

Hodnocení výsledku, referenční meze:
Pozitivní/hraniční/neurčitý/negativní

Provádí se:
z technických důvodů  úterý až čtvrtek