název | označení | jednotky | metoda | výsledek do | poznámka | antikoag.činidlo |
Základní CD znaky T a B lymfocytů | ||||||
celkové T lymfocyty - relativní | CD3 | % | FACS | 24 hodin | heparin, EDTA, citrát | |
celkové T lymfocyty - absolutní | 10E9/l | nutný KO a dif. | ||||
pomocné T lymfocyty - relativní | CD4 | % | FACS | 24 hodin | heparin, EDTA, citrát | |
pomocné T lymfocyty - absolutní | 109E/l | nutný KO a dif. | ||||
cytotoxické/supresorové T lymfocyty - relativní | CD8 | % | FACS | 24 hodin | heparin, EDTA, citrát | |
cytotoxické/supresorové T lymfocyty - absolutní | 10E9/l | nutný KO a dif. | ||||
B lymfocyty - relativní | CD19 | % | FACS | 24 hodin | heparin, EDTA, citrát | |
B lymfocyty - absolutní | 10E9/l | nutný KO a dif. | ||||
NK - buňky spontánní cytotoxicity | ||||||
Fenotyp CD3-/CD16+56 - relativní | NK | % | FACS | 24 hodin | heparin, EDTA, citrát | |
Fenotyp CD3-/CD16+56 - absolutní | 10E9/l | nutný KO a dif. |
název | označení | jednotky | metoda | výsledek do | poznámka | antikoag.činidlo |
Subpopulace T lymfocytů | ||||||
"naive" (panenské) T lymfocyty - relativní | CD45RA | % | FACS | 24 hodin | heparin, EDTA, citrát | |
"naive" (panenské) T lymfocyty - absolutní | 10E9/l | nutný KO a dif. | ||||
"memory" (paměťové) T lymfocyty - relativní | CD45RO | % | FACS | 24 hodin | heparin, EDTA, citrát | |
"memory" (paměťové) T lymfocyty - absolutní | 10E9/l | nutný KO a dif. | ||||
HLA znak II.třídy - relativní | HLA-DR | % | FACS | 24 hodin | heparin, EDTA, citrát | |
HLA znak II.třídy - absolutní | 10E9/l | nutný KO a dif. | ||||
Pozdní aktivační znak na T lymfo - relativní | CD3+/DR+ | % | FACS | 24 hodin | heparin, EDTA, citrát | |
Pozdní aktivační znak na T lymfo - absolutní | 10E9/l | nutný KO a dif. | ||||
Pozdní aktivační znak na CD8 lymfo - relativní | CD8+/DR+ | % | heparin, EDTA, citrát | |||
Pozdní aktivační znak na CD8 lymfo - absolutní | 10E9/l | FACS | 24 hodin | nutný KO a dif. | ||
Stanovení aktivovaných CD8 lymfo - relativní | CD8+/CD38+ | % | heparin, EDTA, citrát | |||
Stanovení aktivovaných CD8 lymfo - absolutní | 10E9/l | FACS | 24 hodin | nutný KO a dif. |
název | označení | jednotky | metoda | výsledek do | poznámka | antikoag.činidlo |
Subpopulace B lymfocytů | ||||||
Stanovení autoreaktivních buněk - relativní | CD5+/CD19+ | % | FACS | 24 hodin | heparin, EDTA, citrát | |
Stanovení autoreaktivních buněk - absolutní | 10E9/l | nutný KO a dif. | ||||
Aktivační znak B lymfocytů - relativní | CD19+/CD23+ | % | FACS | 24 hodin | heparin, EDTA, citrát | |
Aktivační znak B lymfocytů - absolutní | 10E9/l | nutný KO a dif. |
název | označení | jednotky | metoda | výsledek do | poznámka | antikoag.činidlo |
Fagocytóza kvasinek | fagocytóza | % | mikroskopie | 48 hodin | každý den | heparin |
Oxidativní vzplanutí granulocytů | Burstest | % | FACS | 24 hodin | každý den | heparin |
název | označení | jednotky | metoda | výsledek do | poznámka | antikoag.činidlo |
Aktivační testy | ||||||
Časná aktivace T lymfocytů | CD3+/CD69+ | % | FACS | 24 hodin | po-st | heparin |
Časná aktivace B lymfocytů | CD19+/CD69+ | % | FACS | 24 hodin | po-st | heparin |
Pozdní aktivace T lymfocytů | CD3+/CD25+ | % | FACS | 48 hodin | po-st | heparin |
Pozdní aktivace B lymfocytů | CD19+/CD23+ | % | FACS | 48 hodin | po-st | heparin |
Test blastické transformace | BTT | % S + G2 fáze | FACS | 5 dní | pondělí, úterý, pátek | heparin |
Hypersenzitivita na léky | LTT | % S + G2 fáze | FACS | 8 dní | út - čt | heparin |
název | označení | jednotky | metoda | výsledek do | poznámka | antikoag.činidlo |
Paměťové B lymfocyty | % | FACS | 4dny | každý den | heparin, EDTA, citrát | |
Bazotest | Bazotest | % | FACS | 3 dny | út - čt | heparin |
Fenotypizace trombocytů | % | FACS | 2dny | každý den | citrát | |
Protilátky proti trombocytům | PAIg | % | FACS | 2dny | každý den | EDTA |
Transplantační imunologie-kmenové buňky | CD34 | % | FACS | 2dny | každý den | heparin, EDTA, citrát |
Transplantační imunologie-crossmatch | FCXM | % | FACS | 2dny | po dohodě | heparin, EDTA, citrát |
Imunofenotypizace buněk metodou průtokové cytometrie
Imunofenotypizační analýza je součástí laboratorních diagnostických postupů nutných k určení přítomnosti klonu maligních buněk hematopoetického původu, jejich liniové příslušnosti, případně stupně diferenciace.
Imunofenotypizační vyšetření jsou zaměřena především na hematologická onemocnění typu akutní a chronické leukemie, lymfoproliferace/non Hodgkinské lymfomy, myelodysplastické syndromy, myeloproliferativní onemocnění a to v rámci diagnostiky či následného hodnocení follow-up (AML, MPAL, B-ALL, T-ALL, B-LPD), v některých případech též na detekci minimální reziduální choroby (MRD) u pacientů po chemoterapii či po transplantaci.
Fenotypizací lze určit klon mnohočetného myelomu a detailně analyzovat populaci plazmatických buněk též u nemocných s monoklonální gamapatií nejasného klinického významu (MGUS).
Lze diagnostikovat paroxysmální noční hemoglobinurii (PNH) vyšetřením PNH klonů (s vysokou citlivostí).
Imunofenotypizace je přínosná v diagnostice potransplantačních onemocnění.
Dále lze provádět analýzu T lymfocytů v populaci intraepitelových lymfocytů přítomných v biopsiích vzorků sliznice trávicího traktu u pacientů s celiakií.
V bioptických vzorcích sliznice trávicího traktu lze rovněž identifikovat B-NHL vycházející ze slizničních lymfocytů (MALT).
Vyšetřením eosin 5-maleimidu lze identifikovat pacienty se suspekcí na sférocytózu.
Imunofenotypizace obecně využívá imunofluorescenčního průkazu povrchových, cytoplazmatických nebo jaderných molekul krevních buněk monoklonálními protilátkami s vyhodnocením vícebarevnou průtokovou cytometrií. Imunofenotypizace je náročné a drahé vyšetření, které je obvykle indikováno klinickým hematologem.
Vyšetřovaný materiál:
Vlastní vyšetření:
Vyšetření pomocí vícebarevné průtokové cytometrie se provádí na základě klinické suspekce lékaře, kterou je třeba stručně slovně uvést na žádanku.
Analýza probíhá obvykle v několika stupních. Je volen optimální základní vyšetřovaný panel monoklonálních protilátek, který může být rozšířen v následném kroku dle získaného nálezu. V současné době využíváme až osmibarevného panelu monoklonálních protilátek, který přináší rozšířené možnosti pro přesnější a detailnější analýzu zkoumaných populací.
Interpretace výsledku imunofenotypizačního vyšetření:
Výsledek imunofenotypizační analýzy musí být vždy posuzován v kontextu klinického stavu pacienta a výsledků dalších laboratorních vyšetření.
Na výsledkovém listu je udáváno procentuální hodnocení jednotlivých buněčných populací, detailní popis zachycené patologické populace a podstatnou součástí je slovní hodnocení se závěrem.
Laboratoř se pravidelně zúčastňuje národních (SEKK, MLP-ÚHKT) a mezinárodních (INSTAND) cyklů externí kontroly kvality. Je zapojena do řady grantových projektů a zajišťuje též postgraduální a předatestační vzdělávání zdravotnických pracovníků FN i mimo rámec FN HK.